試驗(yàn)設(shè)計(jì) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選用2月齡BALB/C二級(jí)雌性小鼠(體重為22-28 g)作為研究對(duì)象，按照體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組、低劑量組(0.5 g/kg·bw)、高劑量組(1.0 g/kg·bw)，潤腸通便試驗(yàn)另設(shè)陰性對(duì)照組和模型對(duì)照組。 受試樣品及飼喂劑量：采取灌胃法，飼喂低聚木糖的低劑量組為0.5 g/kg·bw和高劑量組為1.0 g/kg·bw，每日灌胃1次，劑量為0.02 (ml/g·bw)，連續(xù)灌胃14 d，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組灌等量蒸餾水。 腸道菌群的計(jì)數(shù)：給予受試物前及最后1次給受試物后24 h，無菌采取小鼠糞便，放入已滅菌的裝有3 ml稀釋液的試管中，稱重后振蕩混勻，使糞便完全均質(zhì)于稀釋液中。采取10倍系列稀釋至10-8。選擇合適的稀釋度分別接種在BBL培養(yǎng)基、EMB 培養(yǎng)基、疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷瓊脂培養(yǎng)基及LBS瓊脂培養(yǎng)基上。培養(yǎng)24、48 h 后，以菌落形態(tài)，革蘭氏染色鏡檢計(jì)數(shù)菌落，計(jì)算每克濕便中的雙歧桿菌、大腸桿菌、腸桿菌及乳桿菌菌數(shù)，取對(duì)數(shù)后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。 小腸推進(jìn)試驗(yàn)：在連續(xù)給予受試物14 d后，各組小鼠禁食24 h。試驗(yàn)開始前各劑量組給予受試物，正常對(duì)照組及模型對(duì)照組給予等量蒸餾水。30 min后，除正常對(duì)照組外，其余各組灌喂復(fù)方地芬諾酯50 mg(kg·bw)。20 min后，各組灌喂15%碳黑墨水 0.5 ml/只。20 min后，頸脫臼處死動(dòng)物，立即取出自幽門至盲腸部的整段小腸，不加牽引平鋪成直線。測(cè)量小腸全長和幽門至墨水運(yùn)動(dòng)前沿位移，按照以下公式計(jì)算小腸推進(jìn)率: 小腸推進(jìn)率(%) =墨水移動(dòng)距離(cm) /小腸全長(cm) ×100%。 小鼠排便試驗(yàn)：在連續(xù)給予受試物14 d后，各組小鼠禁食24 h。除正常對(duì)照組外，其余各組灌胃復(fù)方地芬諾酯10 mg/(kg·bw)。將小鼠放入鼠籠單獨(dú)飼養(yǎng)，正常飲水進(jìn)食。1 h 后，給各組小鼠灌胃15%碳黑墨水0.5 ml/只(試驗(yàn)組碳黑墨水含相應(yīng)劑量的受試物) 。觀察記錄每只小鼠自灌胃復(fù)方地芬諾酯起的首黑便時(shí)間以及6 h內(nèi)排便重量。 試驗(yàn)結(jié)果 (1)低聚木糖對(duì)小鼠體重的影響 由表1可知，灌胃低、高劑量的低聚木糖對(duì)小鼠的體重沒有影響。
(2)低聚木糖對(duì)小鼠腸道菌群的影響 由表2可知，在灌胃前腸道菌群無差異的小鼠，連續(xù)給予低劑量組(0.5g/kg·bw)、高劑量組(1.0 g/kg·bw)低聚木糖14 d后，與對(duì)照組相比，腸桿菌及腸球菌數(shù)量并無顯著變化，乳桿菌及雙歧桿菌數(shù)量均有顯著提高；其中低劑量組乳桿菌增長5%(P＜0.05)，雙歧桿菌增長 9%(P＜0.05)；高劑量組乳桿菌增長5%(P＜0.05)，雙歧桿菌增長9%(P＜0.05)。與灌胃前相比，灌胃后空白對(duì)照組腸球菌顯著增加14% (P＜0.05)，乳桿菌增長10%(P＜0.01)；灌胃后低劑量組腸桿菌減少5.2%(P＜0.05)，乳桿菌增長9%(P＜0.05)，雙歧桿菌增長14%(P＜0.01)；灌胃后高劑量組腸桿菌減少9%(P＜0.05)，乳桿菌增長8%(P＜0.05)，雙歧桿菌增長16%(P＜0.01)。
(3)對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率的影響 糞便中雙歧桿菌與腸桿菌數(shù)量的比值（B/E值）可作為腸道微生物定植抗力的臨床指標(biāo)，能從正反2個(gè)方面來評(píng)價(jià)腸道菌群結(jié)構(gòu)的狀況；B/E值≥1表示腸道定植抗力正常，B/E值＜1表示腸道定植抗力降低。由表3可知，在飼喂受試物前后，各組小鼠的B/E值均大于1，說明小鼠腸道定植力正常；在飼喂前，各組小鼠B/E值無顯著差異；服用低聚木糖14 d后，對(duì)照組的B/E值與飼喂前沒有差異，低、高劑量組與飼喂前相比分別提高28%和26%(P＜0.01)；與對(duì)照組相比，分別提高14%和13% (P＜0.05)，以上結(jié)果表明低、高劑量的低聚木糖均具有可以改善腸道菌群結(jié)構(gòu)的功能。
連續(xù)給予受試物21 d后，陰性對(duì)照組和模型對(duì)照組的小腸推進(jìn)率分別為72.5%和38.2%，陰性對(duì)照組小鼠小腸推進(jìn)率高于模型對(duì)照組90%(P＜0.01)，說明造模成功。低劑量組和高劑量組的小腸推進(jìn)率分別為77.4%和84.0%；與模型對(duì)照組相比，低、高劑量組的小腸推進(jìn)率分別提高102%和120%(P＜0.01)，這些結(jié)果表明低、高劑量的低聚木糖具有改善小鼠小腸推進(jìn)率的功能。 (4)對(duì)小鼠排便功能的影響 由表4可知，在連續(xù)給予受試物21 d后，與陰性對(duì)照組相比，模型對(duì)照組的首次排黑便時(shí)間增加186.5%(P＜0.01)，6 h內(nèi)排黑便重量減少55.5%(P＜0.01)，說明造模成功。與模型對(duì)照組相比，低、高劑量組首次排黑便時(shí)間分別降低76.7%和85.6%(P＜0.01)；6 h內(nèi)排黑便重量分別提高126%和183%(P＜0.05)，說明低、高劑量的低聚木糖具有有效改善便秘小鼠的通便作用。
試驗(yàn)結(jié)論 低、高劑量的低聚木糖干預(yù)后，小鼠糞便內(nèi)乳桿菌、雙歧桿菌及B/E值均顯著增加，且腸桿菌顯著減少；此外小鼠首粒排黑便時(shí)間顯著縮短，排黑便總量顯著增加，小腸推進(jìn)率顯著提高，因此本研究表明低聚木糖具有改善小鼠胃腸道菌群及潤腸通便的功效。
參考資料： 魏濤, 趙建元, 高兆蘭, 王莉, 李思鈺, 黃雪, 鄭夢(mèng)蕊. 低聚木糖調(diào)節(jié)BALB/C小鼠腸道菌群及潤腸通便作用研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013, 41(01):159-160+163. |
