試驗(yàn)?zāi)康?/span> 本試驗(yàn)旨在探究合生素代替抗生素對(duì)斷奶新西蘭肉兔生長(zhǎng)性能及盲腸微生物菌群結(jié)構(gòu)的影響。 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選取300只35日齡斷奶新西蘭肉兔，隨機(jī)分為3組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只兔（公、母各半）。合生素組（H組）試驗(yàn)兔飼喂添加0.04 %合生素（由枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌與低聚木糖復(fù)合而成）的日糧，抗生素組（K組）試驗(yàn)兔飼喂添加土霉素的日糧，對(duì)照組（D組）飼喂基礎(chǔ)日糧（基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平如表1）。 合生素配置：枯草芽孢桿菌制劑和凝結(jié)芽孢桿菌制劑1∶1混合后，再與低聚木糖2∶1配伍，均勻混合制成。低聚木糖純度為95%，枯草芽孢桿菌制劑活菌數(shù)為109 cfu/g；凝結(jié)芽孢桿菌制劑活菌數(shù)為1010 cfu/g。 預(yù)試驗(yàn)飼喂3 d，正式試驗(yàn)連續(xù)飼喂42 d。
試驗(yàn)結(jié)果 （1）生長(zhǎng)性能 由表2可知，合生素組試驗(yàn)兔平均日采食量、平均日增重均顯著高于對(duì)照組和抗生素組（P<0.05）；合生素組和抗生素組試驗(yàn)兔腹瀉率顯著低于對(duì)照組，成活率顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；合生素組兔料重比均略低于抗生素組和對(duì)照組，但差異不顯著（P>0.05）。研究表明，飼料中添加合生素對(duì)肉兔的促生長(zhǎng)作用優(yōu)于抗生素，在預(yù)防腹瀉病發(fā)生、提高成活率方面，合生素和抗生素效果相當(dāng)。
（2）盲腸OTU聚類 通過與數(shù)據(jù)庫(kù)Silva138比對(duì)，進(jìn)行物種注釋，對(duì)不同分類層級(jí)統(tǒng)計(jì)，物種注釋統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3。依據(jù)聚類OTUs結(jié)果，得到合生素組、抗生素組和對(duì)照組之間共有、特有的OTUs及每個(gè)組10個(gè)樣品間的共有、特有的OTUs，結(jié)果見圖1。由圖1可知，合生組共有OTUs數(shù)目比抗生素組增加了17個(gè)，比對(duì)照組增加了28個(gè)，表明飼料中添加合生素增加了肉兔盲腸共有物種的數(shù)量；合生組特有的OTUs數(shù)目比抗生素組減少了118個(gè)，比對(duì)照組減少了128個(gè)，以對(duì)照組特有的OTUs數(shù)目最多。表明斷奶肉兔在不受飼料中外源益生菌和抗生素干擾時(shí)，盲腸具有較多的微生物物種，側(cè)面反映飼料中添加的合生素和土霉素抑制了盲腸某些微生物物種的增殖，特別外源益生菌的作用更大。
（3）盲腸微生物物種相對(duì)豐度 根據(jù)物種注釋結(jié)果，選取每個(gè)組在各分類水平（Phylum、Class、Order、Family、Genus）上最大豐度排名前10的物種，生成物種相對(duì)豐度柱形累加圖；同時(shí)對(duì)各分類水平排名前10的物種的相對(duì)豐度值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 由圖2可知，在門水平上，優(yōu)勢(shì)物種主要是擬桿菌門、厚壁菌門、疣微菌門，占比在85%以上。由表4可知，在門水平上，合生組未鑒定的門、脫硫桿菌門、放線菌門、其他門相對(duì)豐度均顯著高于抗生素和對(duì)照（P<0.05）；合生組變形菌門相對(duì)豐度顯著低于抗生素組（P<0.05）。合生素組擬桿菌門相對(duì)豐度略低于抗生組和對(duì)照組，但差異不顯著（P>0.05）。
由圖3可知，在綱水平上，優(yōu)勢(shì)物種主要是擬桿菌門-擬桿菌綱、梭菌綱、疣微菌綱，占比在80%左右。由表5可知，在綱水平上，合生組未定義的擬桿菌門-擬桿菌綱、脫硫弧菌綱和其他綱相對(duì)豐度均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；合生組丙型-變形桿菌綱相對(duì)豐度顯著低于抗生素組（P<0.05）。合生素組擬桿菌門-擬桿菌綱相對(duì)豐度略低于抗生組和對(duì)照組（P>0.05）。
由圖4可知，在目水平上，優(yōu)勢(shì)物種主要是擬桿菌綱-擬桿菌目、疣微菌目和顫螺菌目，3類物種之和占所有目水平分類的65%以上。由表6可知，在目水平上，合生組未定義的擬桿菌綱-擬桿菌目相對(duì)豐度顯著高于對(duì)照組（P<0.05），合生組擬桿菌綱-擬桿菌目相對(duì)豐度略低于抗生素和對(duì)照組，疣微菌目相對(duì)豐度略高于抗生素和對(duì)照組（P>0.05）。
由圖5可知，在科水平上，占優(yōu)勢(shì)的物種主要是Muribaculaceae、艾克曼菌科、理研菌科、顫螺旋菌科，占比在50%以上。由表7可知，在科水平上，合生組巴恩斯氏菌科相對(duì)豐度顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。合生組Muribaculaceae相對(duì)豐度略低于抗生素組和對(duì)照組（P>0.05），艾克曼菌科和理研菌科相對(duì)豐度略高于抗生素組和對(duì)照組（P>0.05）。
由圖6可知，在屬水平上，占優(yōu)勢(shì)的物種主要是阿克曼菌屬、理研菌科RC9腸道群、另支菌屬，占比在20%以上。由表8可知，在屬水平上，合生組另支菌屬和毛螺菌科NK4A136組相對(duì)豐度顯著高于對(duì)照組（P<0.05），其他物種在屬水平的相對(duì)豐度與對(duì)照組和抗生素組差異不顯著（P>0.05）。
放線菌門可產(chǎn)生多種抗生素，如鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、慶大霉素，還能產(chǎn)生各種蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶、維生素B12和有機(jī)酸等。另支菌屬屬于擬桿菌門的一種相對(duì)新的細(xì)菌屬，革蘭氏陰性，專性厭氧，是腸道共生的細(xì)菌，可生產(chǎn)多種短鏈脂肪酸（丙酸和乙酸鹽），具有抗炎機(jī)制；另支菌屬可能對(duì)肝纖維化、癌癥免疫治療和心血管疾病等具有保護(hù)作用，與鏈球菌具有拮抗作用。 因此，在合生素組新西蘭肉兔盲腸放線菌門和另支菌屬相對(duì)豐度升高，對(duì)抑制有病原菌增殖、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收意義重大，這也是合生素能夠增加肉兔平均日增重、降低腹瀉率的原因之一。 變形菌門包括大腸桿菌、沙門氏菌、幽門螺桿菌、霍亂弧菌等多種病原致病菌；丙型-變形桿菌綱是所知的細(xì)菌中種類最多的一綱，很多重要的病原菌屬于這個(gè)綱，如沙門氏菌屬 （腸炎和傷寒）、耶爾辛氏菌屬（鼠疫）、弧菌屬（霍亂）、綠膿桿菌。 本試驗(yàn)中，合生素組變形菌門和丙型-變形桿菌綱相對(duì)豐度顯著降低，表明本研究配伍的兔專用合生素減少了肉兔腸道中有害菌的數(shù)量，能夠維持腸道健康。 （4）盲腸微生物物種多樣性分析 由表9可知，合生素組直觀觀測(cè)到的物種數(shù)目（Observed_species）增多，比對(duì)照組提高了0.93%，比抗生組提高了1.17%；合生素組Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)均高于對(duì)照組和抗生素組，表明合生素組群落具有較高多樣性和均勻度；但是合生素和抗生組的估計(jì)群落樣品中包含的物種總數(shù)（Chao1）和估計(jì)群落中OTU數(shù)目（ACE）均低于對(duì)照組。 在本次測(cè)序當(dāng)中，所有品種的覆蓋率（goods_coverage）皆大于99%，表明測(cè)序結(jié)果已經(jīng)基本覆蓋樣本的多樣性，測(cè)序數(shù)據(jù)有效，且合生素組的goods_coverage指數(shù)顯著高于對(duì)照組；但是合生素的PD_whole_tree指數(shù)低于抗生組和對(duì)照組，但差異不顯著（P>0.05）
試驗(yàn)結(jié)論 在新西蘭兔日糧中添加由枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌與低聚木糖配伍而成的合生素代替土霉素，具有顯著的促生長(zhǎng)作用，能夠維持良好的盲腸微生物菌群結(jié)構(gòu)，是一種較理想的抗生素替代品，可用于肉兔綠色養(yǎng)殖生產(chǎn)中。 參考文獻(xiàn)： 屈平平，李濤，楊明彩，姜八一，溫華梅.合生素對(duì)斷奶新西蘭肉兔生長(zhǎng)性能及盲腸微生物菌群結(jié)構(gòu)的影響[J].飼料研究,2022,第45卷(16): 70-77. |
